生长特性:贴壁生长
运输方式:冻存细胞,快递干冰运输;复苏之后,常温下运输。
细胞来源:ATCC来源,国家工程细胞研究中心。
包装:培养瓶加说明书。
细胞冻存:液氮冻存。
用途:提供用于科研研究,不得用于临床检测。
培养条件:37℃,5% CO2,PH值7.2~7.4,无菌恒温培养。
细胞数量:1×106个
细胞传代:1:4~1:6传代;每周换液2~3次
细胞复苏:
1、打开水浴锅, 预热到37度
2、从液氮罐中出冻存的细胞,迅速放入37度水浴锅快速溶解
3、在超净台中,把溶解的细胞移入离心管,(离心管内先加入2ML左右的培养基).1000RPM离心5分钟
4、弃上清,加入1ML培养基,吹打均匀,移入培养瓶内,(培养瓶内先加入4-5ML培养基),37度过5%CO2培养箱培养
5、第二天,用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。
细胞传代:
1、当细胞融合度达到90%以上时,给细胞传代;
2、37°C水浴预热培养基;
3、在超净台中,弃培养基,加入2-5mlPBS清洗细胞后,再加入1ml胰酶消化细胞;
4、显微镜下观察到细胞变圆,有细胞开始脱离瓶壁时,加入5ml培养基终止消化;
5、用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞,并轻轻吹打将细胞吹散;
6、将细胞移入离心管中,1000pm离心5min;
7、弃上清,加入15-20ml的培养基(含血清)重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中(确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间),细胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶),混匀细胞悬液,确保细胞均匀分布;
8、将培养瓶置于37°C,5% CO2的无菌培养箱中培养。
细胞冻存:
1、将细胞消化下来,移入离心管离心,弃上清
2、准备冻存液比例:50%FBS+40%培养基+10%DMSO(现用现配)或95%FBS+5%DMSO(现用现配)
3、加1.5毫升冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内.
冻存时间。放入4度冰箱10分钟. 放入-20度冰箱1-3小时后.再放入-80度冰箱过夜,第二天放入液氮罐保存
4、原则:慢冻速溶
5、加1.5毫升冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内。