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细胞 产地:ATCC细胞货期:现货细胞状态:冻存细胞运输:复苏常温齐一生物科技(上海)有限公司,专业培养细胞菌株,提供免费复苏,保证售后!欢迎来电或者在线咨询选购!
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细胞培养首先分为原代培养和传代培养。原代培养需要从组织中消化、分离、纯化出单细胞,然后继续进行传代、冻存;
传代培养首先:细胞复苏:1.应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-38度,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化.2.在无菌台内将完全培养基加入培养瓶内,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养瓶内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养,24h后换液;也可复苏当时离心(1000pm 5min左右)后,完全培养基重悬培养,适时换液。细胞传代:1.贴壁细胞:对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死细胞,50ml培养瓶加入消化液约0.6ml,按此比例进行消化,(根据配制强度经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml完全培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后收集离心(1000pm 5min左右),新鲜培养基重悬沉淀,加入完全培养基后继续培养或实验.2.悬浮细胞:一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度或需更换新培养基,可先离心(1000pm,5min左右)后加入完全培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养.
微生物检测冻干质控菌种使用说明书1 复苏菌种前应准备适于该菌种生长的固体、液体培养基和培养设备,所有操作均应在符合生物安全保护及无菌条件下进行。2 启开菌种前,用75%酒精棉消毒西林瓶表面。在无菌条件下,按铝盖上的箭头方向打开塑盖,撕开铝盖,打开西林瓶胶塞,加入0.3mL左右的配套液体培养基,用无菌滴管反复吹吸,将冻干菌种溶解成为悬液,然后用无菌滴管或接种环移至斜面、平板或液体培养基,并连同剩余菌悬液的西林瓶一起放置于36℃培养箱中进行培养。(菌种与培养和保存方法对应表见附表1,培养基、培养方法和传代保存方法见附表2)。3 次日观察菌种的生长情况,如未生长,应继续培养24h,或吸取培养之后的菌悬液中再次接种培养基,培养24h观察。4 菌株为一次性使用品,开启之后不能反复使用或保存,暂不开启的菌种应在4℃保藏。5 复苏后的菌种在传1-2代后使用,建议菌种使用5代后弃用。客户须知:详细说明进行细胞培养的组织,并确定组织是由客户提供还是本公司提供;尽可能提供该细胞的培养条件,或者由本公司摸索培养条件;对于一些常见的培养组织,因为保存运输的不便可能会降低培养的成功率,建议客户选择由本公司提供相应的组织。根据客户需要,可提供该细胞 的培养,培养周期视细胞类型和生长情况而定。预防细胞污染的注意事项1)实验进行前,超净台用紫外灯照射30~60min,然后用75%酒精擦拭超净台台面,并开启超净台风机运转20min左右再开始实验操作。2)实验用品用75%酒精擦拭后才能放入超净台内;实验用品用完应移出超净台,以利于气流的流通。实验完成后用75%酒精擦拭超净台台面。3)每次操作只处理一种细胞;即使不同细胞使用相同的培养基也不要共享同一瓶培养基,避免细胞间的交叉污染。4)操作时小心取用无菌的物品,避免污染。勿碰触吸管尖头,不小心碰触后应立即更换;不要在打开的容器瓶口正上方操作,容器打开后,倾斜45°操作,操作完成后及时盖上瓶盖。5)CO2培养箱的清洁是较易被忽视的地方,应1~2个月对培养箱定期进行清洁消毒。先用75%酒精擦拭培养箱内壁、隔板、水盘2~3次,用双蒸水清洗,再用酒精棉球擦拭一遍,最后紫外灯照射4h以上。水盘内加入无菌水(应每周更换),待培养箱内温度、湿度、CO2浓度稳定后再放入细胞。
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